学校消毒采样与检测规范实践指南

一、总则

托幼机构作为儿童集中活动场所，其消毒质量直接关系到儿童健康。根据《托幼机构消毒卫生规范（DB 33/T 2082-2017）》，本规范旨在明确托幼机构消毒采样与检测的技术要求、操作流程及结果判定标准，确保消毒措施科学有效。本规范适用于各级各类托幼机构，包括幼儿园、托儿所及早教中心等。

二、采样前准备

（一）人员要求

采样人员需接受专业培训，熟悉采样流程及生物安全防护要求，佩戴医用外科口罩、一次性手套，必要时穿戴防护服。采样前需清洁双手，避免污染采样工具。

（二）工具与试剂

1. 采样工具：无菌规格板（5cm×5cm）、无菌棉拭子、无菌营养琼脂平皿（直径9cm）、无菌采样管（含10mL无菌生理盐水及中和剂）、紫外线强度测试仪、风速仪等。
2. 试剂：根据消毒剂类型选择对应中和剂（如含氯消毒剂用硫代硫酸钠中和剂，醇类消毒剂用含卵磷脂的中和肉汤）。
3. 设备校准：采样前需校准流量计、温度计等设备，误差≤5%。

三、采样点位设计

（一）空气采样

1. 布点原则：
   • 室内面积≤30㎡：设内、中、外3点，内、外点距墙1m。
   • 室内面积＞30㎡：设东、西、南、北、中5点，周围点距墙1m。
2. 采样高度：距地面0.8m～1.5m，避开通风口、门窗等气流干扰区域。
3. 采样方法：
   • 沉降法：将普通营养琼脂平皿置于采样点，暴露5分钟，盖上平皿盖送检。
   • 撞击法：使用六级安德森采样器，采样流量28.3L/min，采样时间5分钟。

（二）物体表面采样

1. 高频接触部位：玩具、桌面、床栏、门把手、水龙头等。
2. 采样面积：
   • 规则表面：用无菌规格板框定100cm²区域，用棉拭子横竖往返涂擦5次，转动棉拭子连续采样4个规格板面积。
   • 不规则表面：直接涂抹物体表面，估算采样面积。
3. 采样方法：将棉拭子放入含10mL中和剂的采样管中，送检前振荡80次。

（三）手卫生采样

1. 采样时机：被检人清洁或消毒处理后采样。
2. 采样方法：双手五指并拢，用棉拭子从指根到指端涂擦2次，剪去手接触部分，放入采样管送检。儿童每只手采样面积按20cm²计，成人按30cm²计。

（四）餐饮具采样

1. 采样部位：餐具内壁、杯口、筷子下段（进口端5cm处）。
2. 采样方法：
   • 大肠菌群检测：按GB 14934附录A.2.1执行发酵法，或附录A.2.2执行纸片法。
   • 菌落总数检测：将5根筷子下段置入10mL无菌生理盐水中振荡20次，取样液接种平皿。

四、检测方法与流程

（一）微生物培养

1. 细菌菌落总数：

   • 将采样液接种营养琼脂平皿，36℃±1℃培养48小时，计数平板上菌落数。

   •  

2. 大肠菌群：按GB 4789.3执行初发酵与复发酵试验，报告检出或未检出。

3. 金黄色葡萄球菌：按GB 4789.10执行定性检验。

（二）化学污染物检测

1. 甲醛：采用酚试剂分光光度法，采样后24小时内完成检测。
2. 苯系物：使用活性炭管吸附，二硫化碳解吸后通过气相色谱法分析。
3. TVOC：采用Tenax-TA吸附管，热解吸后注入GC-MS检测22种特征化合物。

（三）物理参数监测

1. 温湿度：使用数字式温湿度计，分辨率0.1℃、1%RH。
2. 风速：采用热线风速仪，测量范围0.01～30m/s，精度±3%。
3. 紫外线强度：使用紫外线强度测试仪，距灯管1米处测量，新灯管强度≥90μW/cm²，使用中灯管≥70μW/cm²。

五、结果判定与报告

（一）微生物指标限值